Évaluation de l’activité antibactérienne et antifongique de l’huile essentielle des agrumes

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RODRIGUES, Amanda Sabino [1], SILVA, Michelli Aparecida Bertolazo da [2]

RODRIGUES, Amanda Sabino; SILVA, Michelli Aparecida Bertolazo da. Évaluation de l’activité antibactérienne et antifongique de l’huile essentielle des agrumes. Revue scientifique pluridisciplinaire de la base de connaissances. 03 ans, Ed. 06, vol. 03, pp. 106-118, juin 2018. ISSN : 0959-2448

Résumé

Huiles essentielles d’agrumes représentent une classe importante de substances chimiques sécrétées par les plantes, présentant plusieurs avantages pour la santé humaine, les plantes qui dispose de superbes intéressent générant une activité antimicrobienne dans les pros biotechnologie donc plusieurs microorganismes pièce de résistance aux antibiotiques. Dans ce contexte, preuve de l’activité biologique dans les extraits permet le développement de nouveaux produits. L’objectif de ce travail pour évaluer l’activité antibactérienne et antifongique des huiles essentielles de citron vert de Tahiti (Citrus aurantifolia) et orange (Citrus sinensis) poire contre le microorganismes Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Pseudomonas aeruginosa ( ATCC 27853), Staphylococcus epidermidis (ATCC 14990) et Candida albicans (ATCC 289065). La méthode utilisée pour l’extraction des huiles essentielles a distillation par la vapeur, à l’aide de glisser l’hexane de solvants et le dichlorométhane pour la séparation des fractions. L’évaluation des résultats a été réalisée en mesurant le diamètre du halo d’inhibition sur les disques avant croissants trempé avec 10 µ l de chaque fraction. Les résultats pour les deux sont prometteurs, nécessitant la réalisation de nouveaux clients pour la confirmation de l’efficacité du produit.

Mots clés : huile essentielle, Orange, poire, citron vert Tahiti, activité antibactérienne, antifongique.

1. Introduction

La production brésilienne d’Orange et de citron en 2013, selon l’IBGE-Institut brésilien de géographie et de statistique, a été de 18,5 millions de tonnes. La plupart de la production est dans l’état de São Paulo, à la production de jus, ce qui génère une quantité considérable de déchets industriels. Le souci de l’environnement a des chercheurs motivés pour trouver un utilitaire pour les déchets industriels, comme ceux-ci, une fois générée, besoin d’une bonne destination ne pas de générer des impacts environnementaux, nuire à la biodiversité. Ceci étant dit, il y a un intérêt croissant pour des études de biotechnologie proposant l’alternative utilise des déchets agroindustrial biologiquement actives, réutilisation et valorisation de substances qui seraient autrement être mis au rebut. Le développement de projets en utilisant les déchets industriels, en particulier dans le développement de nouveaux médicaments, de nourriture, de centrales et de prévention de la pollution sont d’une grande utilité pour le développement durable (PELIZER et coll., 2007 ; REZZADORI et al., 2009 ; SCHENBERG, 2010).

Le nombre de cas d’infections bactériennes et fongiques ainsi que la résistance acquise par ces microorganismes antimicrobiennes a appelé l’attention avant la communauté et les chercheurs. Dans ce contexte, la recherche de nouvelles substances actives dans la lutte contre les infections si, ce qui la rend extrêmement nécessaire. Si l'on considère que les nouvelles espèces sont fréquemment découverts, on estime que seulement 1 % de l’étendue de la biodiversité existante a été utilisé. Ainsi, il semble être de nombreuses sources pourtant d’être exploré à la recherche de nouveaux antibiotiques et des antifongiques (MICHAEL cas et al., 2010).

Ce qui précède, le présent travail vise à évaluer l’activité préalablement antibactérienne et antifongique de l’huile essentielle d’Orange épluche poires (Citrus sinensis) et Tahiti citron vert (Citrus aurantifolia), visant le développement futur d’une produit avec activité antimicrobienne.

2. Matériel et méthodes

Pour effectuer les expériences ont été obtenus poire orange (Citrus sinensis) et Thaiti citrons (Citrus aurantifolia) prêt-à-manger dans un Supply Center de Paraná S/A-CEASA/PR.

2.1 huile essentielle d’orange Extractions Pera

L’extraction de l’huile essentielle d’Orange poire a été effectuée selon la méthode de Trancoso (2013) : isolé au départ, la partie de l’épicarpe est (à l’extérieur de la peau) qui ont été coupés dans un diamètre de 4 mm à l’aide de 128 grammes d’écorce pour chaque extraction. Trois extractions effectuées avec poire orange. La méthode utilisée était le hidrodestilação dans l’appareil Clevenger (distillation par la vapeur drag) avec ajout de 500 ml d’eau distillée avec une durée de 5 heures à une température constante de 96 degrés C.

2.2 extraits de l’huile essentielle de citron vert Tahiti

Il y avait deux extractions avec 56 grammes de zeste de citron haché de Tahiti dans un diamètre de 4 mm, avec 200 ml d’eau distillée à hidrodestilação dans l’appareil Clevenger (distillation par glisser la valeur) avec une durée de 3 heures à la température de 96 degrés C.

2.3 extraction par solvant

Les extraits obtenus étaient partagés avec le dichlorométhane et l’hexane, à l’aide de 5 ml de solvant pour chaque 100 ml de solution d’huile/eau dans une ampoule à décanter. Les solutions obtenues sont ensuite stockés dans des béchers et laissés au repos pendant 24 heures achever les volatilisation des solvants organiques, par conséquent, uniquement l’huile essentielle requise.

2.4 évaluation de l’activité antibactérienne

Pour l’évaluation de l’effet antibactérien des fractions obtenues dans l’extraction d’huile essentielle, utilisée espèces bactériennes : Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) et Staphylococcus epidermidis (ATCC 14990). Micro-organismes ont été semées dans des plats de Pétri stérile avec agar Mueller-Hinton KASVI®.

Ont été utilisés pour le développement de halos d’inhibition disques stériles de papier filtre imbibés de 10 μL de chaque fraction obtenue huile essentielle à l’extraction par solvant. Pour contrôler, ont été utilisées, l’amikacine, antibiotiques clindamycine et Vancomycin DME®. Les plaques ont été conservés dans une étuve à 37 degrés C pendant 48 heures. Les halos d’inhibition ont été mesurés puis analyse préliminaire d’activité antimicrobienne. Tous les essais ont été réalisés en trois exemplaires.

2.5 évaluation de l’activité antifongique

Pour l’évaluation de l’effet antibactérien des fractions obtenues dans l’extraction d’huile essentielle, espèces de champignons a été utilisé Candida albicans (ATCC 289065), semés en boîtes de Pétri stériles avec agar Sabouraud KASVI®.

Ont été utilisés pour le développement de halos d’inhibition disques stériles de papier filtre imbibés de 10 μL de chaque fraction obtenue huile essentielle à l’extraction par solvant. Pour contrôler les disques ont été utilisé papier filtre stérile imbibé de nystatine crème 25 000 UI/g (NEO® chimie), les plaques ont été conservés à une température de 25 degrés C pendant 96 heures. Les halos d’inhibition ont été mesurés puis analyse préliminaire d’activité antimicrobienne. Tous les essais ont été réalisés en trois exemplaires.

3. Résultats et discussion

3.1 evaluation de l’activité antibactérienne

activité antibactérienne évaluation 3.1.1 poire Orange (Citrus sinensis)

Le tableau 1 montre le résultat du diamètre moyen d’inhibition obtenu à partir des évaluations de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle d’Orange poire en extraction avec solvant dichlorométhane et l’hexane. On constate qu’il y avait qu'aucun présence de halos d’inhibition pour les fractions ne testé huile essentielle. Toutefois, cela n’empêche pas nouvelles recherches sont menées en ce qui concerne le potentiel de l’action antibactérienne en face de s. aureus et s. epidermidis, tester les autres méthodes d’extraction.

Les antibiotiques à la vancomycine, clindamycine et amikacine étaient utilisés comme témoin positif dans ce test. Amikacine présenté le meilleur résultat pour les deux microorganismes et pour s. aureus, la moyenne de 25,4 mm était halos et s. epidermidis était moyenne de 32,1 mm.

Tableau 01. Le diamètre moyen d’inhibition des fractions d’huile essentielle d’Orange poire et contrôles pour Staphylococcus aureus et Staphylococcus epidermidis.

Antimicrobien/Fraction Valeur moyenne du halo d’inhibition (mm)

S. aureus

Valeur moyenne du halo d’inhibition (mm)

S. epidermidis

Clindamycine 17,4 27,8
Vancomycine 15.6 19.3
Amikacine 25.4 32.1
Fraction de dichlorométhane 0 0
Fraction de l’hexane 0 0

 

activité antibactérienne lime de Tahiti évaluation 3.1.2 (Citrus aurantifolia)

Sont exprimés dans le tableau 2, les valeurs du diamètre moyen d’inhibition obtenues des évaluations de l’activité antibactérienne de l’huile essentielle de citron Thaiti en extractions avec solvants dichlorométhane et l’hexane. Vous pouvez voir qu’il y a eu développement de halos d’inhibition pour tous les micro-organismes testés avec la fraction de dichlorométhane. Compte tenu de la fraction d’hexane, il y avait le développement de halos d’inhibition pour s. epidermidis et p. aeruginosa

 Le tableau 2. Le diamètre moyen d’inhibition des fractions d’huile essentielle de citron Thaiti et des contrôles pour Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa

Antimicrobien/Fraction Valeur moyenne du halo d’inhibition (mm)

S. aureus

Valeur moyenne du halo d’inhibition (mm)

S. epidermidis

Valeur moyenne du halo d’inhibition (mm)

P. aeruginosa

Amikacine 25.45 28,5 37
Vancomycine 0 0 19
Clindamycine 23.15 23.15 22,6
Fraction de dichlorométhane 7.3 12.3 14
Fraction de l’hexane 0 12.6 10.3

 

La lime de Tahiti (Citrus aurantifolia) a 70 % de d-limonène dans votre shell, où l’huile essentielle est extraite (JAIN et al., 2007). Selon Oliveira (2013) d-limonène, possède une vaste application industrielle en cosmétique comme fragrance et zone de nourriture comme agent antimicrobien qui peut être observé dans cette étude.

Le résultat obtenu dans des boîtes avec des micro-organismes p. aeruginosa et s. epidermidis s’est avéré significatif, avec diamètre de halos au-dessus de 10 mm, montrant une sensibilité de micro-organismes en ce qui concerne les huiles essentielles. Ces résultats étaient semblables à ceux qui ont démontré par Smith (2008), qui a signalé le développement de halos d’inhibition de 14 mm.

Subramenium et al., (2014) explore l’efficacité du d-limonène comme antibiotiques potentiels contre des espèces du genre Streptococcus et a conclu que le limonène a environ 75 à 95 % de l’activité antibiotique contre les agents pathogènes étudiés.

Gerhardt et al., (2012) a fait l’évaluation de l’activité antibactérienne des extraits alcooliques de l’écorce des agrume bergamote-ponkan, pamplemousse et citron-bergamote, comme la concentration minimale inhibitrice (CMI) et de la concentration minimale bactéricide (CBM) . Dans cette étude, l’extrait de citron-bergamote a présenté le meilleur résultat et les plus sensibles aux extraits de bactéries a été p. aeruginosa.

3.2 évaluation de l’activité antifongique

activité antifongique évaluation 3.2.1 poire Orange (Citrus sinensis)

Au tableau 3 peuvent observer les valeurs moyennes du diamètre d’inhibition obtenue à partir des évaluations de l’activité antifongique de l’huile essentielle d’Orange poire en extraction avec solvant dichlorométhane et solvant de l’hexane. On peut observer une sensibilité pertinente du champignon en face de la fraction de dichlorométhane.

Tableau 3. Le diamètre moyen d’inhibition des fractions d’huile essentielle d’Orange poire et de contrôle pour c. albicans.

Antimicrobien/Fraction Valeur moyenne du halo d’inhibition (mm)

C. albicans

Nystatine 13
Fraction de dichlorométhane 17
Fraction de l’hexane 0

 

L’extraction au dichlorométhane présentait le meilleur résultat, où le diamètre du halo était de 17 mm. Oliveira et coll. (2007) ont montré une comparaison de l’activité antifongique et antioxydant de citron fruits, Orange, pomme, aubergine, pommes de terre, grains de riz et de blé sur le champignon Aspergillus flavus. Parmi tous les fruits, les oranges et le citron 80 % exposé 95 % de l’activité antifongique, mettant en vedette les plus grands pourcentages d’inhibition.

Des résultats similaires ont été obtenus par Chandra et al., (2012) en qui a mené une recherche de l’activité antifongique des huiles essentielles d’Orange, citron, mandarine, pindaíba et guabiroba sur les souches de c. albicans (ATCC 289065), c. tropicalis ( ATCC 40042), c. krusei (ATCC 40147) de la cavité buccale, ce qui conduit à l’élaboration de la candidose buccale. Dans cette recherche, la poire Orange présenté halo de 14,5 mm à c. albicans, c. tropicalis 16,5 mm et 40,0 mm à c. krusei.

Selon Martos et al., (2007) dans votre étude sur l’effet des huiles essentielles de citron, mandarine, pamplemousse et orange sur le niger, a. flavus…, p. chrysogenum et p. verrucosum, huile essentielle d’Orange est plus efficace contre a. niger.

Évaluation de la chaux activité antifongique 3.2.2 de Tahiti (Citrus aurantifolia)

Dans le tableau 4 peuvent être observés les valeurs du diamètre moyen d’inhibition obtenue à partir des évaluations de l’activité antifongique de l’huile essentielle de citron Thaiti en extraction avec solvant dichlorométhane et l’hexane. Vous pouvez voir certaines sensibilité du champignon en face de la fraction de dichlorométhane.

Tableau 4. Le diamètre moyen d’inhibition des fractions d’huile essentielle de citron Thaiti et contrôle pour c. albicans.

Antimicrobien/Fraction Valeur moyenne du halo d’inhibition (mm)

C. albicans

Nystatine 13.5
Fraction de dichlorométhane 8.3
Fraction de l’hexane 0

 

Selon Bhagavani et al., (1992), 60 % d’huiles essentielles possède une activité antifongique et antibactérienne de la pièce de 35 %. La candidose est une infection très fréquente et Candida albicans est considéré comme l’un des principaux agents responsables de cette (LIMA et al., 2006).

Il a été possible d’observer la présence de diamètre important des halos d’inhibition sur l’extraction au dichlorométhane, montrant le résultat de l’auréole de l’inhibition moyenne de 8,3 mm. Lima et coll. (2006) ont montré un résultat équivalent, en ce que l’huile essentielle de citron (c. limon) inhibée 42 % des souches de différentes espèces de Candida qui ont été utilisés, avec des halos d’inhibition jusqu'à 10 mm.

Araújo et coll. (2005) ont montré l’effet antifongique in vitro de l’extrait de pelures de citron sur c. albicans, c. krusei, c. tropicalis, c. stellatoidea extrait de citron présente une activité antifongique sur c. albicans, c. tropicalis et c. krusei auréoles de inhibition de 11 mm à 18 mm.

Conclusion

Les résultats obtenus montrent que :

L’huile essentielle d’Orange poire a montré aucune activité antibactérienne contre les micro-organismes s. aureus et s. epidermidis.

Tahiti chaux huile essentielle ont montré une activité antibactérienne contre les souches de s. aureus, s. epidermidis et p. aeruginosa, extraction au dichlorométhane présentait des halos de plus grand diamètre par rapport à l’extraction à l’hexane.

Évaluation de l’activité antifongique, huiles essentielles de citron vert de Tahiti et orange poire a montré l’activité dans l’extraction au dichlorométhane en mettant l’accent sur l’huile essentielle d’Orange poire montrant inhibiteur potentiel plus grand.

On a besoin de davantage de recherches dans le but d’analyser l’activité antimicrobienne des huiles utilisées, compte tenu des autres variables telles que : techniques d’extraction de solvants différents, micro-organismes, toxicité, ainsi que l’utilisation des méthodes d’analyse des recettes, isolement et purification des principes actifs, la recherche de l’applicabilité des composants dans le traitement des infections.

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[1] Diplôme universitaire en biotechnologie de l’Université Tuiuti do Paraná (Curitiba, PR).

[2] Profa pharmacien. Candidat au doctorat à l’Université Tuiuti do Paraná (Curitiba, PR).

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