Маркеры раковых стволовых клеток, связанные с развитием и агрессивным фенотипом при раке поджелудочной железы

ОРИГИНАЛЬНАЯ БУМАГА

RODRIGUES, Camila Juliano Salvador ^[1], SILVEIRA, Elita Ferreira da ^[2], VARGAS, Rafael da Silveira ^[3], GIACOMO, Giordano Gatti de ^[4], BIANCHIN, Marino Muxfeldt ^[5]

RODRIGUES, Camila Juliano Salvador. Et al. Маркеры раковых стволовых клеток, связанные с развитием и агрессивным фенотипом при раке поджелудочной железы. Revista Científica Multidisciplinar Núcleo do Conhecimento. Год 05, эд. 10, 12, стр. 102-122. Октябрь 2020 года. ISSN:2448-0959, Ссылка на доступ: https://www.nucleodoconhecimento.com.br/здравоохранение/рак ‎

РЕЗЮМЕВВЕДЕНИЕ

Справочная информация: Раковые стволовые клетки, также известные как опухолевые инициируя клетки, предлагается нести ответственность за лекарственная устойчивость и развитие рака отчасти из-за их способности самообновляться и дифференцироваться в неоднородные линии раковых клеток. Цель: Это исследование было разработано для исследования роли раковых стволовых клеток в раке поджелудочной железы. Методы: Ретроспективный клиникопатологический анализ был проведен у 112 пациентов с диагнозом аденокарцинома протоков поджелудочной железы в период с 2005 по 2010 год, и иммуногистохимия была выполнена с антителами против CD133, CD24 и OCT4. Положительное ядерное, цитоплазмическое или мембранное окрашивание для каждого антитела оценивалось по интенсивности окрашивания, классифицировалось на группы с низким/умеренным или сильным окрашиванием. Результаты были проанализированы по отношению к клиникопатологическим параметрам каждого пациента. Результаты: Существовал установлена связь между окрашивание маркеров с некоторыми переменными, связанными с худшим прогнозом, будучи три маркера, присутствующих в большинстве опухолевых клеток и связанных с прогрессированием опухоли. Мы полагаем, что раковые стволовые клетки присутствуют с самого начала инициации опухоли и неразрывно связаны с развитием опухоли. Хотя наличие стволовых клеток было связано с молекулярной биологией различных опухолей, их экспрессия при раке поджелудочной железы еще не была клинически зарегистрирована. Вывод: Наличие стволовых клеток и их роль в опухолевом раком поджелудочной железы можно рассматривать как ценные прогностические факторы, хотя задействованный механизм нуждается в дальнейшем исследовании. Повышение понимания роли раковых стволовых клеток и канцерогенеза может в конечном итоге генерировать новые идеи для молекулярно-диагностических и терапевтических подходов.

Ключевые слова: Раковые стволовые клетки, рак поджелудочной железы, AC133 Антиген, CD24 Антиген, OCT4.

ВВЕДЕНИЕ

Несмотря на прогресс в диагностике и лечении рака за последние десятилетия, он остается одной из наиболее распространенных причин смерти во всем мире. Хотя потенциально излечимы при ранней диагностике, ранняя диагностика остается проблемой в ежедневной клинической практике. Многие виды рака диагностируются на поздней стадии, когда терапевтические варианты уже не эффективны (BARBOSA et al., 2018).

Аденокарцинома протока поджелудочной железы (PDAC) является очень агрессивным заболеванием, как правило, диагностируется на продвинутой стадии и для которых несколько эффективных методов лечения доступны. Это неоплазма, заболеваемость которой почти равна ее смертности. Причина, почему рак поджелудочной железы имеет такой плохой прогноз и почему он имеет такой низкий терапевтический ответ на химиотерапию и лучевую терапию являются вопросы, которые побудили поиск ответа, который может изменить течение этого заболевания. Несмотря на достижения в области хирургических методов, которые сегодня считаются единственным лечебным вариантом, средняя 5-летняя выживаемость составляет менее 5% (1-3%) (BARBOSA et al., 2018; SOTO et al., 2006). Он считается неоплазией с худшим прогнозом из более чем 60 видов рака, о чем свидетельствует его уровень заболеваемости, почти равный уровню смертности (SAKORAFAS et al., 2000). Следует отметить, что раннее выявление рака, на стадии, которая все еще может быть вылечена, связано с большей терапевтической эффективности и в настоящее время является одним из способов улучшения исхода пациентов с диагнозом рак поджелудочной железы (ALLEGRA; TRAPASSO, 2012).

Молекулярная биология рака поджелудочной железы напрямую связана с его быстрым прогрессированием и низкой терапевтической реакцией. Хорошо задокументировано, что появление опухолевой клетки является результатом накопления мутаций в ее ДНК, способных морфологически и функционально изменять свои нормальные свойства (FANG et al., 2013; RICCI-VITIANI et al., 2007). Запуск этого процесса и его молекулярная эволюция, кульминацией которого является образование опухолевой клетки и ее соответствующие характеристики, характеризуют процесс канцерогенеза. В литературе хорошо понимается, что развитие неоплазии предполагает ряд молекулярных изменений, которые приводят не только к появлению и выживанию опухолевой клетки, но и к ее способности вторгаться в соседние ткани и формировать отдаленные метастазы (LI; JIAO, 2003).

Среди процессов, в последнее время причастных к канцерогенеза и прогрессии опухоли, изменения в раковых стволовых клетках (CSCs) по-прежнему плохо изучены в рак поджелудочной железы без удовлетворительных результатов, и они заслуживают больших усилий в выяснении их последствий и взаимосвязи в приобретении злокачественных фенотипов поджелудочной железы. Последние данные свидетельствуют о том, что CSCs играют решающую роль не только в генерации и поддержании различных тканей, но и в развитии, прогрессировании и терапевтической устойчивости различных типов опухолей (BALIC et al., 2012).

CSCs принадлежат к дифференцированной группе клеток внутри тумор с самообновляя и дифференцируя свойствами, подобными к нормальным стволовым клеткам, давая подъем к неоднородным линиям тумора которые формируют одну тумор. Они могут разделить и возникнуть несколько клеток, которые составляют опухоли, тем самым увековечивая их рост и предлагая устойчивость к химиотерапии механизмами еще не хорошо понял. Из-за этого они представляют собой важную исследовательскую цель (TAI, 2005).

Внутренняя агрессивность рака поджелудочной железы, с его высокой способностью к местному вторжению, высоким метастатическим потенциалом, поздней диагностикой и терапевтической устойчивостью, кажется, частично связана с популяцией CSCs, которые составляют эти опухоли (HU; FU, 2012). Кроме того, было показано, что PDAC содержит не только однородную популяцию CSCs , но и различные субпопуляции, которые могут быть вовлечены в прогрессирование опухоли. До сих пор выявленные CSCs поджелудочной железы составляют меньшинство опухолевых компонентных клеток (около 1-5%) и имеют высокую способность к самообуветию (ANSARI et al., 2012). Наиболее важным клиническим аспектом, однако, является то, что эти CSCs очень устойчивы к химиотерапии и лучевой терапии, что приводит к резистентности и быстрому рецидиву заболевания. В настоящее время одной из больших проблем онкологии является выявление и изучение характеристик этих CSCs , особенно в PDAC, в которых было сделано несколько открытий (KOBAYASHI; NORONHA, 2015).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ВЫБОР СЛУЧАЯ И ОБРАЗЦЫ ОПУХОЛЕЙ

Образцы тканей были взяты из когорты из 112 последовательных раковых заболеваний поджелудочной железы, диагностированных с 2005 по 2010 год, отобранных из обычной помощи больницы де Кленицес де Porto Alegre (HCPA), Департаментом патологии и группы желчных путей и поджелудочной железы. Иммуногистохимические анализы проводились в парафиновых тканевых блоках, уже хранящихся в отделении патологии HCPA, после одобрения Научным комитетом и Комитетом по этике в области медицинских исследований учреждения. Из медицинских записей были записаны следующие переменные: возраст, пол, сорт опухоли, состояние лимфатических узлов, возникновение метастазов, полученное лечение (тип операции, лучевая терапия и химиотерапия), свободное выживание и общее выживание.

TISSUE MICROARRAY (TMA) ИММУНОИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Tissue Microarray (TMA) массив является метод, впервые описанный Kononen et al. (1998) и является отличным инструментом для расследования патологии. Речь идет о группировке в одном блоке разумного количества образцов тканей, что позволяет изучать иммуногистохимическое выражение молекулярных маркеров, при большом использовании материала, наличии внутреннего контроля, а также времени и рентабельных. Этот метод также позволяет стандартизировать реакции, эффективную репрезентативность за счет использования различных областей опухоли, изучение большого количества образцов одновременно, простоту интерпретации и масштабное исследование прогностические или прогностические факторы рака (рисунок 1).

Рис. 1. Примеры некоторых образцов опухолевых тканей, включенных в исследование методом TMA

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Для проверки связи между иммуногистохимическими переменными и интенсивностью иммунореакции с переменными характеристик людей был использован немараметрический подход с точным тестом Фишера. Для проверки связи численного переменного возраста с иммуногистохимическими переменными и интенсивностью был использован тест Манна-Уитни У.

Связь между маркерами стволовых клеток и различными клиникопатологическими характеристиками пациенто [включая возраст, пол, дифференциацию опухоли, стадию, категорию опухолевых узлов и метастазов (TNM) и удаление опухоли] в оценивалась коэффициентом корреляции Пирсона или его χ² мере необходимости. По интенсивности эти категории были дихотомизированы на низкую/умеренную интенсивность ((0-2+) или высокую интенсивность (≥3+).

Метод Каплан-Мейера использовался для оценки вероятности выживания. Кривые выживания сравнивались с помощью теста журнала ранга, который утверждает в соответствии с нулевой гипотезой, что функции выживания не отличаются друг от друга.

Общее время выживаемости измерялось от времени операции или биопсии до даты смерти (по какой-либо причине) или до последнего последующего действия. Время выживаемости без болезней измерялось с даты гистологического диагноза или операции до даты первого события неудачи без болезней (определяемого как локорегиональный рецидив), отдаленной болезни или смерти в результате любой причины. Значение было установлено в P < 0.05. Все статистические анализы проводились с использованием R (версия 3.6.0).

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Иммуногистохимические анализы показали наличие маркеров поверхности стволовых клеток опухоли для трех антител, проанализированных в клетках PDAC. Всего в исследование было включено 112 пациентов с раком поджелудочной железы: 59 (52,6%) мужчин и 53 (47,4%) женщины со средним возрастом при постановке диагноза 63 года (диапазон, 36-93 года, SD ± 10,3) и средний период после постановки диагноза 16,2 месяца.

При сравнении интенсивности сигнала антител не было существенной разницы между полами. Пятьдесят пациентов (48.08%) умер в течение последующего периода.

Среди всех пациентов, включенных, 16 (15.2%) были в патологиической стадии I, 32 (30,4%) были в патологии II стадии, 25 (23,8%) были в патологиической стадии III, и 32 (30,4%) были в патологиической стадии IV. В тех случаях, когда информация о опухолевой оценке была доступна, 2,8% карцином были хорошо дифференцированы, 62,8% были умеренно дифференцированы, и 34,2% были плохо дифференцированы.

Что касается стадии TNM, 11,2% были T1 (опухоль меньше 2 см), 38,3% были T2 (опухоль больше, чем 2 см или вторжение соседних тканей), 19,6% были T3 (опухоль любого размера вторжения близлежащих тканей, но без ущерба для целиакии или верхней мезентерической артерии), 21,5% были T4 (опухоль любого размера ущерба жизненно важных органов и целиакии или выше мезентерической артерии) , и 9,3% были Tx (размер опухоли неизвестен). Для участия лимфатических узлов, 31,7% были в стадии N0 (без метастазов лимфатических узлов), 31,7% были N1 (региональные метастазы лимфатических узлов), 6,5% были N2 (более одного пораженного лимфатического узла цепи), и 29,9% были Nx (не по переоценке). Что касается наличия метастазов, 66,6% были в стадии M0 (без отдаленных метастазов), 30,2% были M1 (далекие метастазы), и 3,6% были Mx (не пог евабельно).

Около 75,9% образцов были получены из опухолевой ткани поджелудочной железы, и около 26% были из образцов метастазов, с печенью (65,7%) наиболее пострадавший участок, за которым следуют лимфатические узлы (14,2%), брюшной полы (8,5%) и другие (11,4%).

Паллиативное лечение было предоставлено 68 лицам, или 76,40% от общего числа проанализированных людей.

Что касается расположения опухоли, 81,6% опухолей были расположены в голове поджелудочной железы, 22,9% в организме, и 6,4% в хвосте.

В таблице 1 кратко излагается общий описательный анализ лиц, участвовавших в исследовании.

Таблица 1. Общий описательный анализ

^#DPT: Duodenopancreatectomy

CD133 ИММУНОСТИМУЛЯТОРОВ В РАКОВЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТКАХ В КЛЕТКАХ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

CD133 иммуностимулятор присутствовал в плазменной мембране и цитоплазме при умеренной и сильной интенсивности (рисунки 2C и 2D), с преимущественно сильной интенсивностью. Положительная или отрицательная реакция была подтверждена положительным контролем (плацентой), используемым в исследовании. Иммунореактивность CD133 не наблюдалась при нормальном протоковом эпителии поджелудочной железы (рисунок 2).

Рис. 2. Иммуногистохимический анализ маркеров стволовых клеток рака в образцах рака поджелудочной железы TMA. (2A, 2B) Выражение CD24 наблюдалось в основном в цитоплазме опухолевых клеток. (2С, 2D) Выражение CD133 наблюдалось в основном в мембране и цитоплазме опухолевых клеток, редко ядерных. (2E, 2F) Выражение OCT4 наблюдалось в ядре опухолевых клеток, с фокусным выражением и сильной интенсивностью. Наименьшее увеличительное поле (40x) представлено в глобальной панели и самом высоком увеличительном поле (100x) в уменьшенной панели.

Что касается хирургического лечения, 95,1% пациентов, проходящих лечение 1 (билиодигестивный шунт) были CD133-положительный, 70,0% пациентов, проходящих лечение 2 (частичная хирургия) были CD133-положительный, и 81,2% пациентов, проходящих лечение 3 (всего дуоденопанкреатэктомия) были CD133-положительный. Существовала значительная связь (P=0,019) между хирургическим лечением и сигналом CD133. В дополнение к хирургическому лечению, только тип образца был значительно связан с сигналом CD133, на уровне 5% значимости.

Степень дифференциации опухоли (хорошая, умеренная или плохая) не показала существенной связи с положительным иммуностимулятором CD133, хотя было отмечено, что по мере прогрессирования опухоли интенсивность окрашивания увеличивалась (83,7% при плохо дифференцированных опухолях). Не было также никакой существенной связи между постановкой TNM и положительным иммуностенсивом CD133, но на более поздних стадиях маркировка усиливается, даже несмотря на то, что здесь наблюдается наличие ККС с самых ранних стадий. Это подтверждает гипотезу о том, что CSCs присутствовали с начала процесса канцерогенеза.

В таблице 2 показан описательный анализ переменных вместе с проверкой их связи с иммунореактивностью CD133, данный точным тестом Фишера.

Таблица 2. Ассоциация переменных с положительным CD133.

*Точный тест Фишера

^#DPT: Дуоденопанкреатэктомия

Таблица 3 показывает p-значения и ассоциации переменных с интенсивностью, когда окрашивание CD133 было положительным. По точному тесту Fisher (P =  0,036), только этап M показал значительную связь с интенсивностью CD133; то есть, опухоли, которые уже метастазы сильно окрашены для CD133.

Таблица 3. P-значения ассоциации с интенсивностью. 

*Точный тест Fisher

^#DPT: Дуоденопанкреатэктомия

CD24 ИММУНОСТИМУЛЯТОРОВ В РАКОВЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТКАХ В КЛЕТКАХ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

CD24 иммуностимесяния (рисунки 2A и 2B) присутствовал в плазменной мембране и цитоплазме как при слабых / умеренных (41,6%) и сильный (58.3%) интенсивности, но с меньшей интенсивностью по сравнению с CD133 (рисунки 2C и 2D). Положительные и отрицательные реакции были подтверждены положительным контролем (плацентой), используемым в исследовании. В таблице 4 показан описательный анализ переменных вместе с проверкой их связи с положительностью CD24, данной точным тестом Fisher. Положительный сигнал CD24 был замечен у 98,3% мужчин, но не было никакой связи между сексом и CD24 положительность (P=0,343). Только тип собранной выборки и паллиативного лечения были в значительной степени связаны с сигналом CD24, на уровне 5% значения (P 0,010 и 0,042 соответственно).

Таблица 4. Ассоциация переменных с положительным CD24. 

*Точный тест Fisher

^#DPT: Дуоденопанкреатэктомия

Иммунореактивность CD24 не наблюдалась при нормальном протоковом эпителии поджелудочной железы. Положительный сигнал CD24 был замечен у 98,6% пациентов, проходящих паллиативное лечение, что было значительным (P=0,042). Из-за их продвинутой постановки опухоли, у них был более сильный сигнал CD24 по сравнению с людьми, которые прошли полную дуоденопанкреатэктомию. Сигнал CD24 был сильнее у людей, которые прошли паллиативное лечение в качестве варианта лечения (98,6%) по сравнению с теми, кто этого не сделал (13,6%).

Степень дифференциации и постановки опухоли не показала существенной связи с CD24-положительным окрашиванием, и не было значительных различий между плохо дифференцированными или продвинутыми опухолями по сравнению с хорошо дифференцированными и ранними опухолями по отношению к положительным CD24.

Таблица 3 показывает связь переменных с интенсивностью, когда CD24 был положительным. Только наличие метастазов (MTX) было значительно связано с интенсивностью, где печень и брюшной полости показали сильную положительность по сравнению с метастазами в других местах, таких как лимфатические узлы и другие ткани.

ОК4 ИММУНОСТИМУЛЯТОРОВ В РАКОВЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТКАХ В КЛЕТКАХ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

ИММУНОстимулятор OCT4 показал различную закономерность по отношению к другим проверенным антителам. Частота положительных случаев была не так высока, как наблюдается с двумя другими антителами испытания, но при положительном, его интенсивность была очень сильной (рисунки 1E и 1F). Иммуностеинирование произошло в ядре опухолевых клеток в 31,5% случаев и не окрашивало 68,7% анализируемых опухолей. Иммунореактивность OCT4 не наблюдалась при нормальном протоковом эпителии поджелудочной железы. Никакая переменная не была существенно связана с сигналом OCT4, на уровне 5% значения. Средний возраст OCT4-положительной группы составил 62,62 года, а в oct4-отрицательной группе – 63,23 года. Тем не менее, не было существенной разницы между группами в отношении возраста (P=0,547).

Хотя это и не статистически значимым, интересный вывод из анализа окрашивания OCT4 является то, что более дифференцированной опухоли, тем больше интенсивность окрашивания, в то время как плохо дифференцированные опухоли имели низкую интенсивность окрашивания (66,6% против 21,6%). Клетки положительные для OCT4 имеют больший потенциал для дифференциации.

АНАЛИЗ ВЫЖИВАЕМОСТИ

О кривых выживания и их связи с тремя маркерами, все группы представили очень похожие кривые, так что журнал ранга тест не указывает на какую-либо существенную разницу между кривыми относительно положительных сигналов от трех антител. Кривые Kaplan-Meier для интенсивности CD133, CD24 и OCT4, подтвержденные значениями p-значений теста журнала, ни одна из кривых выживаемости существенно не отличается по интенсивности. Таким образом, положительность маркеров не меняет выживаемость пациентов, включенных в исследование.

ОБСУЖДЕНИЕ

CSCs недавно были связаны с прогрессированием рака и используется для выявления прогностические факторы и цели для терапии в нескольких видах рака (DEAN et al., 2005). Примечательно, что роль CSCs не очень хорошо понимается или характеризуется раком поджелудочной железы. Кроме того, было опубликовано несколько докладов о моделях и последствиях присутствия CSCs. Учитывая отсутствие данных, мы ретроспективно проанализировали экспрессию CSCs в образцах рака поджелудочной железы с использованием иммуногистохимии и проверили его роль в прогрессировании опухоли и терапевтической резистентности к аденокарциноме протоковой поджелудочной железы.

Молекулярная биология рака поджелудочной железы напрямую связана с его быстрым прогрессированием и низкой терапевтической реакцией. Хорошо задокументировано, что появление опухолевой клетки является результатом накопления мутаций в ее ДНК, способных морфологически и функционально изменять ее (FANG et al., 2013; RICCI-VITIANI et al., 2007). Спусковой крючок этого процесса и вся его эволюция, кульминацией которого является образование опухолевой клетки и ее соответствующие характеристики, характеризуют процесс канцерогенеза, уже значительно выяснены для нескольких типов неоплазий. Однако, для некоторых видов рака, таких как рак поджелудочной железы, процесс остается неопределенным (KOBAYASHI; NORONHA, 2015).

Большинство злокачественных опухолей следуют естественной истории, которая может быть разделена на четыре стадии: злокачественная трансформация, рост опухолевых клеток, локальное вторжение и метастазы. Процесс канцерогенеза, или злокачественной трансформации, происходит на различных стадиях и результаты из-за накопления генетических изменений и мутаций, которые вызваны несколькими факторами, в том числе экологических факторов, таких как радиация и химические вещества (AYOB; RAMASAMY, 2018). Однако для прогресса этого процесса канцерогенеза может потребоваться иметь определенные клетки с характеристиками стволовых клеток, такие как потенциал для самообнавления и регенерации, а также высокий индекс пролиферации.

Последние данные свидетельствуют о том, что стволовые клетки играют решающую роль не только в генерации и поддержании различных тканей, но и в развитии и прогрессировании определенных типов опухолей (BALIC et al., 2012). Для нескольких твердых опухолей, они были показаны гавани различных субпопуляции опухолевых клеток, которые имеют характеристики стволовых клеток и, следовательно, называются опухолевые стволовые клетки (CTTs) или опухолевых клеток (MATSUDA et al., 2012). Раковые стволовые клетки, как представляется, в состоянии инициировать и управлять ростом опухоли в твердых опухолей. CD133, CD24 и OCT4 недавно сообщили перспективных маркеров для CSCs, выраженные в различных опухолей; однако, как нам известно, не было сделано никаких попыток обнаружить их экспрессию в образцах рака поджелудочной железы (MAEDA et al., 2008).

Можно наблюдать, что опухолевые стволовые клетки, или опухолевые маркеры поверхности стволовых клеток, такие как CD133, CD24 и OCT4 присутствуют в клетках опухоли рака поджелудочной железы, подтверждая внутреннюю связь между злокачественным фенотипом поджелудочной железы и наличием стволовых клеток. Не наблюдалось существенной разницы между экспрессией антител и степенью дифференциации опухоли, предполагая, что стволовые клетки опухоли присутствуют с начала опухоли. Следует отметить, что для CD133 и CD24 антител, процент маркер-экспрессии опухолевых клеток увеличилось, как опухоль прогрессировала. Следовательно, более агрессивные, плохо дифференцированные опухоли проявляли большую положительность к наличию антител. С другой стороны, экспрессия антител OCT4 была выше и интенсивнее при хорошо дифференцированных опухолях; таким образом, чем дифференцированнее опухоль, тем больше маркировка. Клетки, которые имеют маркер стволовых клеток для антител OCT4 имеют более высокий потенциал для дифференциации (VILLODRE et al.,, 2016). Это может быть причиной, почему OCT4 отличается с точки зрения выражения от других маркеров, которые были протестированы, хотя эти различия не были статистически значимыми.

OCT4 маркер присутствует только в основном в образцах опухоли, которые были положительными. Эта находка в согласии с теорией, что CSCs представляют собой лишь очень небольшую часть общей популяции опухолевых клеток (PHI et al., 2018). Например, положительные клетки CD133 были обнаружены в 0,7-6,1% (RICCI-VITIANI et al., 2007), 1.8-24.5% (O’BRIEN et al., 2007) первичных раковых клеток толстой кишки, а также в 0,7-3,2% первичных раковых клеток поджелудочной железы с использованием цитометрического анализа потока (HERMANN et al., 2007). Иммуногистохимическое окрашивание выявило экспрессию CD133 у 1-3% образцов гепатоцеллюлярной карциномы (MA et al., 2007).

Хотя маркировка и экспрессия наблюдались с относительно высокой частотой во всех степенях направления опухоли, например, опухоли выразили маркировку раковых стволовых клеток независимо от степени дифференциации, некоторые выводы благоприятствуют гипотезе, что количество стволовых клеток в опухолях больше в опухолях с более агрессивным поведением и с худшим прогнозом. Эта гипотеза подтверждается тем фактом, что CD133 чаще выражался у людей, которые проходили только паллиативное лечение (95,1%) со значительной связью (p-значение < 0,05) между наличием антител и паллиативного лечения. Когда сообщается, что пациент проходил только паллиативное лечение, предполагается, что опухоль была на значительно продвинутой стадии и без возможности лечебного хирургического вмешательства и поэтому проводилось только паллиативное лечение. Аналогичным образом, можно переоценить, что более агрессивные опухоли на более поздних стадиях выражают большую маркировку для CD133 антитела стволовых клеток опухоли. Несколько клинических исследований исследовали связь между экспрессией CD133 и клиническими исходами опухолей; однако результаты противоречивы. Например, выражение CD133 связано с плохим прогнозом рака толстой кишки и гепатокарциномы (CAI et al., 2018).

Что касается стадии TNM, маркировка трех антител (CD133, CD24 и OCT4) не меняться по прогрессии. Примечательно, что опухолевые стволовые клетки присутствовали с самой ранней стадии и что они не увеличиваются во время постановки. Распространенность трех антител и их ассоциации с переменными, как правило, высока, хотя не все антитела имели значение ниже, чем P < 0,05.

Все переменные, которые способствовали неблагоприятный прогноз, такие как расположение опухоли головы поджелудочной железы, преклонный возраст, и наличие метастазов были связаны с высокой распространенностью особенно для выражения CD133 и CD24. Кроме того, это подтверждается идеей, что опухолевые стволовые клетки, когда они присутствуют, связаны с быстрым прогрессированием опухоли и терапевтической устойчивостью. Раковые стволовые клетки имеют определенные характеристики, аналогичные характеристикам нормальных стволовых клеток организма, такие как способность к саморегенератору и плюрипотенции, что порождает неоднородные линии опухолевых клеток, которые образуют ту же опухоль (TAI et al., 2005). Раковые стволовые клетки, вероятно, разделяют многие свойства нормальных стволовых клеток, которые обеспечивают длительный срок службы, в том числе относительную киленцию, устойчивость к наркотикам и токсинам через выражение нескольких транспортеров, активную способность ДНК-ремонт и устойчивость к апоптозу. Таким образом, опухоли могут иметь встроенную популяцию лекарственно устойчивых плюрипотентных клеток, которые могут выжить химиотерапии и заселить опухоль (MARQUES и др., 2010).

Для того, чтобы определить, если CSCs предсказал клинический результат, мы провели Каплан-Мейер анализа выживаемости и показал, что группы представлены очень похожи кривые. Таким образом, тест журнала ранга не указывает на существенную разницу между кривыми относительно наличия трех антител. Хотя они связаны с худшими прогностические переменные, такие как метастазы и паллиативного лечения терапевтических вариантов, не может быть никакой связи между наличием стволовых клеток опухоли и выживаемости пациентов в этом случае; поэтому наличие CSCs не предсказывает хужего выживания.

Открытие раковых стволовых клеток в твердых опухолях изменило наше представление о канцерогенеза. Это опухолевые стволовые клетки участвуют в развитии опухоли и прогрессии является фактом, так как их присутствие было значительным в подавляющем большинстве тканей проанализированы и, в последнее время, многие исследования связывают наличие опухолевых стволовых клеток с развитием нескольких видов рака.

ОКОНЧАТЕЛЬНЫЕ СООБРАЖЕНИЯ

Процесс опухолевого генеза, насколько этот вопрос известен до сих пор, включает в себя постепенное приобретение нескольких аномальные мутации, которые завершаются расширением и распространением более агрессивных субпопуляций клеток, способствуя прогрессированию опухоли и росту. Хотя эта теория хорошо известна, выявление клеток, которые способны вызвать прогрессирование опухоли по-прежнему является предметом многих исследований, чтобы лучше охарактеризовать процесс канцерогенеза и определить эти клетки.

Большая часть информации, которую мы получаем и используем для диагностики, прогноза и лечения неоплазмы поджелудочной железы, происходит от неоднородных популяций с различной степенью созревания и дифференциации. Становится все более актуальным охарактеризовать CSCs для оценки и характеристики канцерогенного маршрута наиболее агрессивных опухолей. Прямым следствием этого является разработка терапевтических стратегий, которые могут действовать на CSCs и возможность определить, с помощью легко доступного метода, который пациенты выиграют больше всего от этого вида лечения.

ССЫЛКИ

ALLEGRA, E.; TRAPASSO, S. Cancer stem cells in head and neck cancer. Onco Targets Ther., v.5, p.375-83, 2012.

ANSARI, D.; CHEN, B.C.; DONG, L.; ZHOU, M.T.; ANDERSSON, R. Pancreatic cancer: translational research aspects and clinical implications. World J Gastroenterol., v.18, n.13, p.1417-24, 2012.

AYOB, A.Z.; RAMASAMY, T.S. Cancer stem cells as key drivers of tumour progression. J Biomed Sci., v.25, n.20, 2018.

BALIC, A.; DORADO, J.; ALONSO-GÓMEZ, M.; HEESCHEN, C. Stem cells as the root of pancreatic ductal adenocarcinoma. Exp Cell Res., v.318, n.6, p.691-704, 2012.

BARBOSA, I.R.; SANTOS, C.A.; SOUZA, D.L.B. Pancreatic cancer in Brazil: mortality trends and projections until 2029. Arq. Gastroenterol., v.55, n.3, p.230-6, 2018.

CAI, X.; LI, J.; YUAN, X.; XIAO, J.; DOOLEY, S.; WAN, X., WHENG, W.; LU, L. CD133 expression in cancer cells predicts poor prognosis of non-mucin producing intrahepatic cholangiocarcinoma. J Transl Med., v.16, n.50, 2018.

DEAN, M.; FOJO, T.; BATES, S. Tumour stem cells and drug resistance. Nat Rev Cancer., v.5, n.4, p.275-84, 2005.

FANG, Y.; YAO, Q.; CHEN, Z.; XIANG, J.; WILLIAM, F.E.; GIBBS, R.A.; CHEN, C. Genetic and molecular alterations in pancreatic cancer: implications for personalized medicine. Med Sci Monit., v.19, p.916-26, 2013.

HERMANN, P.C.; HUBER, S.L.; HERRLER, T.; AICHER, A.; ELLWART, J.W.; GUBA, M.; BRUNS, C.J.; HEESCHEN, C. Distinct populations of cancer stem cells determine tumor growth and metastatic activity in human pancreatic cancer. Cell Stem Cell., v.1, n.3, p.313-23, 2007.

HU, Y.; FU, L. Targeting cancer stem cells: a new therapy to cure cancer patients. Am J Cancer Res., v.2, n.3, p.340-56, 2012.

KOBAYASHI, N.C.C.; NORONHA, S.M.R. Cancer stem cells: a new approach to tumor development. Rev Assoc Med Bras., v.61, n.1, p.86-93, 2015.

KONONEN, J.; BUBENDORF, L.; KALLIONIMENI, A.; BÄRLUND, M.; SCHRAML, P.; LEIGHTON, S.; TORHORST, J.; MIHATSCH, M.J.; SAUTER, G.; KALLIONIMENI, O.P. Tissue microarrays for high-throughput molecular profiling of tumor specimens. Nat Med., v.4, n.7, p.844-7, 1998.

LI, D.; JIAO, L. Molecular epidemiology of pancreatic cancer. Int J Gastrointest Cancer., v.33, n.1, p.3-14, 2003.

MA, S.; CHAN, K.W.; HU, L.; LEE, T.K.W.; WO, J.Y.H.; NG, I.O.L.; ZHENG, B.J.; GUAN, X.Y. Identification and characterization of tumorigenic liver cancer stem/progenitor cells. Gastroenterology, v.132, n.7, p.2542-56, 2007.

MAEDA, S.; SHINCHI, H.; KURAHARA, H.; MATAKI, Y.; MAEMURA, K.; SATO, M.; NATSUGOE, S.; AIKOU, T.; TAKAO, S. CD133 expression is correlated with lymph node metastasis and vascular endothelial growth factor-C expression in pancreatic cancer. Br J Cancer., v.98, n.8, p.1389-97, 2008.

MARQUES, D.S.; SANDRINI, J.Z.; BOYLE, R.T.; MARINS, L.F.; TRINDADE, G.S. Relationships between multidrug resistance (MDR) and stem cell markers in human chronic myeloid leukemia cell lines. Leuk Res., v.34, n.6, p.757-62, 2010.

MATSUDA, Y.; KURE, S.; ISHIWATA, T. Nestin and other putative cancer steam cell markers in pancreatic cancer. Med Mol Morphol., v.45, n.2, p.59-65, 2012.

O’BRIEN, C.A.; POLLETT, A.; GALLINGER, S.; DICK, J.E. A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice. Nature, v.445, n.7123, p.106-10, 2007.

PHI, L.T.H.; SARI, I.N.; YANG, Y.G.; LEE, S.H.; JUN, N.; KIM, K.S.; LEE, Y.K.; KWON, H.Y. Cancer Stem Cells (CSCs) in Drug Resistance and their Therapeutic Implications in Cancer Treatment. Stem Cells Int., n.5416923, 2018.

RICCI-VITIANI, L.; LOMBARDI, D.G.; PILOZZI, E.; BIFFONI, M.; TODARO, M.; PESCHLE, C.; DE MARIA, R. Identification and expansion of human colon-cancer-initiating cells. Nature, v.445, p.111-5, 2007.

SAKORAFAS, G.H.; TSIOTOU, A.G.; TSIOTOS, G.G. Molecular biology of pancreatic cancer; oncogenes, tumor suppressor genes, growth factors, and their receptors from a clinical perspective. Cancer Treat Rev., v.26, n.1, p.29-52, 2000.

SOTO, J.L.; BARBERA, V.M.; SACEDA, M.; CARRATO, A. Molecular biology of exocrine pancreatic cancer. Clin Transl Oncol., v.8, p.306-12, 2006.

TAI, M.H.; CHANG, C.C.; OLSON, L.K.; TROSKO, J.E. Oct4 expression in adult human stem cells: evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis. Carcinogenesis, v.26, n.2, p.495-502, 2005.

VILLODRE, E.S.; KIPPER, F.C.; PEREIRA, M.B.; LENZ, G. Roles of OCT4 in tumorigenesis, cancer therapy resistance and prognosis. Лечение рака Rev., ст.51, стр.1-9, 2016.^[1]

Степень магистра медицинских наук, аспирантура по медицине: Медицинские науки, Федеральный университет Рио-Гранде-ду-Сул (UFRGS), Бразилия.

^[2] Кандидат физиологических наук, Федеральный университет Рио-Гранде (FURG), Бразилия.

^[3] MSc в области генетики и молекулярной биологии, Федеральный университет Рио-Гранде-ду-Сул (UFRGS), Бразилия.

^[4] Студент медицинского факультета Федерального университета Рио-Гранде (FURG), Бразилия.

^[5] Кандидат биологических наук (биохимия) в Федеральном университете Рио-Гранде-ду-Сул (UFRGS), с сэндвич докторской степени в области неврологии – Калифорнийский университет в Ирвине.

Представлено: Сентябрь 2020.

Утверждено: октябрь 2020 года.